产品货号:
KD2195
中文名称:
Super酵母感受态制备与转化试剂盒
英文名称:
Super Yeast Transformation Kit
产品规格:
20T|200T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒可以完成酿酒酵母感受态制备,感受态冻存,转化实验。最突出的优点可一次性制备200支感受态,-80℃冰箱可冻存一年,后续酵母转化实验无需重新制备感受态,操作简单快速,该试剂盒的转化效率与经典酵母转化试剂盒(KD0256)基本相同。如需进一步提高酵母转化效率,可选用百奥莱博的Super酵母感受态制备与转化试剂盒Plus(KD2194)或单独购买YPD Plus Liquid Medium(KD2207),转化产物用YPD Plus复苏,其转化效率可以提高50~100%。
组分 | 20T | 200T |
Y1溶液(制备液) | 10mL | 50mL×2 |
Y2溶液(冻存液) | 1mL | 5mL×2 |
Y3溶液(转化液) | 8mL | 20mL×4 |
保存:-20℃,有效期2年。Y3避免多次冻融;Y1、Y2溶液可2~8℃保存。
- 转化全程要求无菌操作。
- 为了保证转化效率,务必缓慢冻存感受态,感受态不宜直接用液氮冻存。
- 增加酵母质粒的纯度和浓度可以提高转化效率。
- 感受态细胞的制备:
按小体积转化制备20支感受态计,可按比例扩大。- 活化菌种。-80℃保存的菌种在YPDA培养基平板上划线,30℃培养2~4天。
- 挑取酵母单菌落在YPDA培养基平板上划3~5mm的短线,30℃培养2~4天。
- 待酵母单菌落直径长至2mm时,把酵母细胞接种到3mL液体YPDA培养基中,30℃过夜培养。
- 第二天转接到含有50mL液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养,待OD600达到0.4-0.5,3000rpm离心5min,弃上清。(4℃保存1周内的酵母菌液,用3mL接种50mL YPDA培养基过夜培养)
- 用10mL Y1溶液重悬沉淀,3000rpm离心5min,弃上清。
- 加入1mL Y2溶液重悬,按50μL分装于1.5mL无菌冻存管,转文库按600μL分装,感受态细胞即制备完毕,可直接用于转化。
- 制备好的感受态细胞需缓慢冷冻后,再置于-80℃冰箱长期保存。将感受态细胞放入程序降温盒,或用多层纸包裹放入泡沫盒中,先置于-80℃冰箱过夜后,再取出感受态置于-80℃冰箱,可保存一年。使用前室温融化后用于转化。
- 活化菌种。-80℃保存的菌种在YPDA培养基平板上划线,30℃培养2~4天。
- 转化预混液配制:
成分 质粒转化预混液 文库转化预混液 Y3溶液 350μL 2520μL 质粒 5~10μL(≈200ng/μL) 5~15μg(文库质粒) 总体积 360μL(ddH2O补足体积) 2592μL(ddH2O补足体积) - 酵母质粒转化:
- 吸取360μL预混液加入50μL感受态细胞中,反复吹吸沉淀,使酵母细胞完全悬浮于预混液中。
- 30℃的水浴锅中热激60min,每10min混匀一次。对于部分菌种,延长孵育时间可提高转化效率,但不要超过3小时。
- 12000rpm离心15 s,弃上清。
- (可选步骤)用0.5mL YPD Plus Liquid Medium重悬沉淀,30℃摇床震荡培养30~60min。12000rpm离心15 s,弃上清。
- 加入400μL无菌去离子水或0.9%氯化钠溶液重悬菌体,涂筛选培养基平板,30℃培养2~4天。
- 吸取360μL预混液加入50μL感受态细胞中,反复吹吸沉淀,使酵母细胞完全悬浮于预混液中。
- 酵母文库转化:
需用15~50mL离心管- 将2592μL预混液加入到600μL感受态细胞中,震荡使感受态细胞充分悬浮于预混液中。
- 30℃的水浴锅中热激90min,每10min混匀一次。对于部分菌种,延长孵育时间可提高转化效率,但不要超过3小时。
- 3000rpm离心5min,弃上清。
- (可选步骤)用3mL YPD Plus Liquid Medium重悬沉淀,30℃摇床震荡培养90min,3000rpm离心5min,弃上清。
- 加入15mL无菌去离子水或0.9%氯化钠溶液重悬菌体,涂筛选培养基平板,30℃培养2~4天。
- 将2592μL预混液加入到600μL感受态细胞中,震荡使感受态细胞充分悬浮于预混液中。
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